氨氮和pH值對孔雀魚針尾病的影響

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摘要 孔雀魚是我國小型觀賞魚中最主要的養殖種類，但隨著養殖規模的不斷擴大，其病害問題頻發，尤以針尾病最嚴重。本研究于2017年12月至2018年12月，對遼寧某孔雀魚養殖區針尾病開展了為期1年的流行病學調查，其中水質指標檢測結果表明，孔雀魚針尾病發病池的氨氮、pH指標普遍高于未發病水池指標?；诖私Y果，本研究開展了高濃度氨氮、pH值對孔雀魚的急性毒性試驗。氨氮急性毒性試驗結果表明，高濃度氨氮可導致孔雀魚針尾病的發生，24.48、7296h的半致死濃度分別為23.56.4.683.54、2.08mg/L，其對應的非離子氨濃度為1.79、0.360.27、0.16mg/L，氨氮的安全濃度為0.21mg/LopH值對孔雀魚急性攻毒試驗結果表明，異常pH指標未導致孔雀魚針尾病的發生，但導致孔雀魚出現夾尾現象，其中pH=10時孔雀魚夾尾率最高，為23.3%。綜上所述，高濃度的氨氮會導致孔雀魚針尾病的發生，而且針尾病發病率與氨氮濃度成正相關;而pH指標未導致孔雀魚針尾病的發生。

關鍵詞 孔雀魚;針尾病;氨氮;pH值

中圖分類號 S965.8

文獻標識碼 A

文章編號 1007-5739（2019）08-0226-02

孔雀魚是小型觀賞漁業中養殖規模最大、最有經濟欻益的觀賞魚類。在孔雀魚流行行病學調查中發現，孔雀魚針尾病的暴發最嚴重，給養殖業造成了巨大的經濟損失。通過為期1年的水質檢測發現，針尾病發病池的氨氮、pH值普遍高于未發病池。發病池氨氮平均指標為0.539mg/L，為國家V類水，高于國家I類水27倍;pH值平均指標為8.63，屬于國家IV類水。而截至目前，關于氨氮、pH值對孔雀魚針尾病的急性毒性試驗及孔雀魚針尾病影響的研究未見報道。因此，本研究開展高濃度氨氮、pH值對孔雀魚的急性毒性試驗，探討二者對孔雀魚針尾病的影響，以期為孔雀魚針尾病發病機制的研究提供一定的參考。

1材料與方法

1.1試驗動物

試驗魚均購自遼寧省鞍山市某觀賞魚養殖區，魚體長1.2～1.5cm，魚體平均體重（0.05+0.01）go試驗前先暫養1周，選擇健康個體開展試驗，試驗期間停止換水喂食。

1.2試驗方法

1.2.1氨氮毒性試驗。氨氮毒性試驗采用96h靜水法，并采用納氏試劑法檢測。試驗根據氨氮濃度不同共設8個處理，分別為0.0.2、0.4、0.8、1.6.3.2.6.4、12.8mg/L，其中0mg/L為對照。每個處理30尾魚，分別在10L的玻璃缸急性攻毒浸泡96h，水溫26C，pH值8.0，攻毒期間無換水投喂。攻毒期間及時觀察孔雀魚活動及中毒癥狀，同時及時將死亡個體取出，分別記24.48.72.96h時死亡的個體總數。并計算出氨氮濃度在各暴露時間下的半致死濃度（LCso）、安全濃度、對應的非離子氨濃度及死亡率。

1.2.2pH毒性試驗。試驗用鹽酸和氫氧化鈉溶液調節pH值，用pH儀進行檢測。根據pH值不同共設7個處理，分別為4.0、5.06.0、7.0、8.0、9.0、10.0，其中pH=8.0為對照。每個處理30尾魚，分別在10L的玻璃缸急性攻毒浸泡，連續觀察7d，水溫269C，攻毒期間無換水投喂。攻毒期間及時觀察孔雀魚活動及中毒癥狀，同時及時將死亡個體取出記錄數據。

1.3統計分析

所有的數據采用平均值t標準差表示，數據處理用Excel和SPSS統計軟件包進行統計，P<0.05表示差異顯著。以實測氨氮濃度計算各暴露時間下的半致死濃度（LC）和安全濃度（Sc），同時計算出對應的非離子氨的濃度和解離常數（pKa），計算公式如下：

Sc=0.1x96LCsfM";

非離子氨（NH3）=總氨（NH3+NH4*）/[l0（pKa-pH）+1]4）;pKa=0.09018+2729.92/T。

其中，pKa為解離常數，T為開氏溫度。本試驗條件為pH=8.0溫度26C。

2結果與分析

2.1氨氨對孔雀魚急性中毒試驗觀察

孔雀魚氨氮中毒表現分為3個階段：①早期，魚體游動緩慢、鰭條豎立、出現狂游焦躁不安;②中期，魚體聚集在缸的四角，尾鰭、腹鰭下耷，側游側翻，鰓蓋張合速度減慢，尾鰭出現夾尾癥狀;③后期，魚體傾斜浮于水面上，尾鰭逐漸呈現針尖狀，隨后死亡（圖1）。

2.2pH值對孔雀魚急性中毒試驗觀察

孔雀魚pH值中毒表現分為2個階段：①早期，魚體狂游焦躁不安、碰撞缸壁;②后期，魚體游動緩慢，尾鰭、腹鰭下耷，側游側翻，鰓蓋張合速度減慢，部分魚體尾鰭出現夾尾（圖1），隨后死亡。

2.3不同氨氮濃度條件下孔雀魚的存活表現

由表1、圖2可知，12.8mg/L氨氮的孔雀魚死亡率及針尾率最高，分別為100%、30%。6.4mg/L氨氮的孔雀魚夾尾率最高，為66.7%。氨氮對孔雀魚24、48.72和96h的半致死濃度（LCxo）分別為23.56、4.68、3.54、2.08mg/L，對應的非離子氨濃度分別為1.79、0.36.0.27、0.16mg/L;96h的安全濃度（Sc）為0.21mg/L。結果表明，高濃度的氨氮會導致孔雀魚針尾和夾尾的出現，針尾率、夾尾率與氨氮濃度和攻毒時間成正相關。

2.4不同pH值條件下孔雀魚的存活表現

由圖3可知，除pH=4時孔雀魚死亡率為100%外，其他處理孔雀魚死亡率均小于50%。酸堿性較大時，pH值的變化致使孔雀魚死亡率、夾尾率有部分波動，其死亡率在pH=4時最多，為100%;夾尾率在pH=10時最多，為23.3%。在正常酸堿性的水體中，pH=8、pH=9時未出現魚體死亡。研究結果表明，pH值不會導致孔雀魚針尾的出現，但隨著pH值的增加，孔雀魚耐受性減弱。

3討論

試驗結果表明，高濃度氨氮可導致孔雀魚出現針尾，而且針尾率與氨氮濃度及攻毒時間成正相關。隨著氨氮濃度的增高，孔雀魚的死亡率明顯增加。已有研究表明，魚體在高濃度氨氮水環境中，其死亡率均會顯著增加36。在高濃度氨氮毒性下，孔雀魚開始出現游動緩慢、尾鰭和腹鰭下耷、側游側翻、鰓蓋張合速度減慢、后期魚體尾鰭出現針尾。目前，關于氨氮誘發孔雀魚針尾病的相關作用未見報道。但有研究表明，水體中非離子氨因不帶電荷，并具有較強的脂溶性，水生生物如果長期處于高濃度氨氮因子的脅迫下，其排泄系統、生長、代謝系統和滲透壓平衡都會受到一定的影響，甚至影響到水生生物的免疫系統功能。其次，非離子氨不僅能阻止水生生物體內的氮向體外排出，使血液和組織中NH3的濃度升高，造成體內的正常代謝降級或停滯，進而對機體產生一系列毒性影響吧。在高濃度的氨氮脅迫下，魚體免疫力抗應激能力低下，細胞之間通透性增強，非離子氨穿透魚體細胞膜，對其造成損傷，導致魚體呈現病態;當其濃度達到一定值時，不僅會對魚類產生直接毒害作用，而且能夠誘發多種疾病0。因此，非離子氨（NH3）是檢測氨氮水環境的重要指標，也是影響水生生物生存的重要環境因子叫。目前，高濃度氨氮導致孔雀魚出現針尾的機制值得繼續深入研究。

隨著pH脅迫的增強，孔雀魚出現夾尾現象與酸堿濃度成正相關。在酸堿性較強的水體中，孔雀魚會在短時間內大量死亡，僅引起魚體出現夾尾，并不會導致針尾。據報道，高pH值對魚類胚胎發育的負面影響很大，會抑制某些部位的組織發育12;低pH值，會導致魚體機體抗自由基系統的防御能力減弱，進而損害生物膜，使膜的有關脂質過氧化加劇，從而使生物膜變性、壞死。pH值的增加或減小可使魚類體內與外環境之間的滲透壓差值逐漸升高，迫使魚類通過呼吸等方式調節滲透壓，影響魚類的鰓組織2，使其在瀕死狀態下出現鰓蓋外翻，這與本試驗pH攻毒孔雀魚的狀態較為相似。對咸?？ɡ佐~胚胎及仔魚對鹽堿耐受性研究表明，隨著水體堿度的增加，卡拉白魚（Chalcalburnuschalcoides）的孵化率降低、孵化時間增長，而且受精卵發育畸形4。目前，酸堿度導致孔雀魚出現夾尾的機制尚不清楚，有待進一步研究。

綜上所述，氨氮.pH值對孔雀魚急性毒性試驗表明，孔雀魚對氨氮、pH異常水質指標較為敏感，可呈現不同癥狀。高濃度氨氮導致孔雀魚尾鰭呈現針尾狀態，異常pH值會導致孔雀魚發生夾尾現象。

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