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摘要 應用英國RANDOX的ELISA試劑盒和免疫金標試紙同時檢測10份蝦樣，陽性率均為10%，兩種方法都具有微量、特異、準確的優點。前者需要有酶標儀等儀器，試驗時間長、成本高，但能用準確的數字表達抗體水平；后者不需要特殊儀器設備，試驗時間短、成本低，適用于企業自檢和大批量樣品篩選。
關鍵詞 氯霉素；殘留；金標試紙；酶聯免疫
氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作為一種廣譜、高效的抗生素，在國內外常用于動物各種傳染性疾病的治療，也曾在水產養殖業中得到普遍應用；但其在臨床醫學上的毒副作用大，對人類健康構成巨大威脅[1]。因此，動物源食品的質量安全問題受到高度重視，各國均對氯霉素最大允許殘留限量制定了十分嚴格的規定[2]。
20世紀70年代以來，免疫化學分析技術在小分子化合物檢測領域中的應用研究不斷深入。酶聯免疫（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法已成為各監測部門及實驗室內快速檢測氯霉素的常規方法，其靈敏度高、穩定性好[3]，特別適用于大批量樣品篩檢；基于膠體金免疫層析技術（gold immunochromatographic assay，GICA）的快速診斷試紙條（簡稱金標試紙條），已逐漸應用于生物醫學、動植物檢疫、食品安全監督等諸多領域，與ELISA試劑盒相比，其優點是更為簡便快速、無需檢測儀器，且成本低、無污染。
我院與浙江大學農藥與環境毒理研究所根據競爭式GICA原理，研制了動物源食品中氯霉素殘留的膠體金免疫層析試紙條。為了檢驗該試紙的準確性，用英國RANDOX的ELISA試劑盒進行比較試驗研究。
1材料與方法
1.1試驗材料
氯霉素酶聯免疫檢測試劑盒，英國RANDOX（含已被包被抗體的酶標板，酶標記抗原、稀釋劑/洗滌緩沖劑、組織樣品萃取劑、單組分底物/發色劑、牛奶緩沖劑、標準液、反應終止液）。
氯霉素免疫金標快速檢測試紙（鋁箔包裝，內裝檢測卡、干燥劑和比色卡），由浙江大學與寧波市農業科學研究院聯合研制。
待檢蝦10份，取自寧波4個市場。
1.2方法
1.2.1酶聯免疫吸附試驗操作步驟。
（1）樣品前處理：取3g均質好的組織樣品，加入6mL乙酸乙酯，勻漿1min；2 000rpm離心分離15min，抽4mL上層清液，在70℃吹干。加入2mL的異辛烷/三氯甲烷（2∶3）溶解剩余物，渦旋振蕩2min。置于2 000rpm下離心分離15min，取上清液用于檢測。
（2）樣品檢測。根據試劑盒說明書進行。
（3）判定標準。根據標準曲線進行計算。
1.2.2金標試紙試驗操作步驟。
（1）樣品前處理。取3g均質好的組織樣品，加入6mL乙酸乙酯，劇烈振蕩10min，3 000rpm離心5min，轉移4mL上層乙酸乙酯相至另一潔凈試管，50℃下氮流吹干，殘留物溶于1mL正己烷，再加入1mL 磷酸鹽緩沖溶液（PBS），旋渦振蕩1min，3 000rpm離心5min，吸取下層PBS相用于檢測。
（2）樣品檢測。將氯霉素速測金標試紙條取出恢復至室溫，插入各待檢樣品液中開始計時。5～8min后，判讀結果。每個試樣作4個重復。
（3）樣品判斷。通過觀察檢測區檢測線（T）和對照區對照線（C）的色帶顏色判斷樣品中有無氯霉素，并根據比色卡判定氯霉素水平。在對照線出現一條色帶而在檢測線不出現色帶判為陰性；在對照線出現一條色帶而在檢測線出現一條顏色很淡的線判為弱陽性；在對照線出現一條色帶而在檢測線出現一條顏色很深的線判為強陽性。
2試驗結果
在10份蝦樣品中，用ELISA試劑盒檢測，陽性1份，陰性9份，陽性率為10%；用免疫金標試紙檢測，陽性1份，陰性9份，陽性率為10%。
3小結
應用英國RANDOX的ELISA試劑盒和自主研制的免疫金標試紙同時檢測10份蝦樣，陽性率均為10%，兩種檢測方法的檢測結果相符。
目前對蝦產品中的氯霉素殘留檢測已建立了多種方法。在我國，應用最多的是GC/MS法和ELISA法。而通過試驗比較可知，免疫金標快速檢測試紙前處理相對簡單，檢測時不需要特殊儀器設備，且檢測過程只需要8～10min。因此，免疫金標快速檢測試紙適用于大批量樣品的現場初篩和企業的自檢，是一種值得推廣的新的檢測技術。
4參考文獻
[1] 李嘵川，孔軼群.水產品中氯霉素殘留測定方法的分析研究[J].海洋水產研究，2002，23（4）：76-80.
[2] 林維宣.各國食品中農藥獸藥殘留限量規定[M].大連：大連海事大學出版社，2002.
[3] 王自良，王建華，楊艷艷，等.抗氯霉素單克隆抗體雜交瘤細胞株的篩選及金標試紙檢測方法的建立[J].西北農林科技大學學報，2006，34（5）：6-12.
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