<ol id="ebnk9"></ol> 
DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2015.32.130
[摘要] 目的 為了掌握該市各級醫療機構使用中消毒劑微生物污染情況，加強使用中消毒劑的管理，降低院內感染率。方法 在使用現場采集各醫療機構使用中消毒劑，對采集的消毒劑進行污染菌檢測；《醫療衛生消毒標準2012版（合訂本）》。結果 使用中消毒劑合格率為82.6%，醇類消毒劑的合格率為92%，過氧化物類為79.3%，含氯消毒劑為97.6%，碘類消毒劑為98%，醛類消毒劑為76.0%，酚類消毒劑為99.0%；菌落總數超標率為5.5%，霉菌和酵母菌檢出率為1.3%，金黃色葡萄球菌檢出率為2.0%，銅綠假單胞菌檢出率為0.8%，乙型溶血性鏈球菌檢出率為1%。 結論 對使用中的消毒劑要加強管理，正確配制與使用，定期抽樣檢測，降低院內感染。
[關鍵詞] 醫療機構；消毒劑；微生物；污染；檢測
[中圖分類號] R187 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2015）11（b）-0130-03
為了掌握該市各級醫療機構使用中消毒劑微生物污染情況，加強使用中消毒劑的管理，降低院內感染率。在使用現場采集各醫療機構使用中消毒劑，對采集的消毒劑進行污染菌檢測；《醫療衛生消毒標準2012版（合訂本）》。
1 資料與方法
1.1 樣品采集
用無菌方法采取被檢消毒藥10 mL，加入到20 mL無菌試管中，4 h內送檢。
1.2 檢驗過程
1.2.1 菌落總數測定 （1）樣品處理：用無菌吸管吸取消毒液1.0 mL，加入到9.0 mL含相應中和劑的無菌生理鹽水中，震蕩20 s或80次，取1：10稀釋液進行檢測。
（2）實驗步驟：利用滅菌后的吸管提取稀釋10倍的檢測液，共提取2 mL，將檢測液分別注入兩個消毒后的培養皿上（每份1 mL）。然后再取去同樣的檢測液1 mL，將其加入到9 mL的無菌生理鹽水當中，充分震蕩約20 s后制成稀釋100倍的檢測液，再提取2 mL該檢測液，將其分別注入兩個消毒后的培養皿內。選擇普通瓊脂放入水浴鍋中融化，待其冷卻到50 ℃左右后傾倒在各培養皿上，每個培養皿內傾倒約15 mL，傾倒后立即搖動培養皿，使內部的瓊脂能夠與檢測液充分的緩和。待瓊脂完全凝固后可采用倒置培養方法，恒溫培養箱的溫度設定為36 ℃，培養時間為48 h。另外選擇一個空白無菌培養皿，將制備的瓊脂倒入其中，待自然凝固后放入恒溫培養箱內，溫度和培養時間與檢測液相同，作為對照組。
（3）實驗報告：在培養完畢后利用肉眼對培養皿中菌落的數量進行觀察，在完全記錄菌落數量后，將其放在5～10倍的電子放大鏡下進行復查，提高菌落計數的準確率。記錄同一稀釋濃度下培養皿內菌落的數量，取平均值作為菌落生長數。選擇其中菌落生長數量在30～300之間的培養皿，將菌落數與1 mL消毒劑內所含有的菌落數量相乘，單位設定為CFU/mL，如果一個稀釋度內無病菌生長，其報告內菌落指數應低于10 CFU/mL。
1.2.2 霉菌、酵母菌的測定 （1）實驗步驟：選取稀釋度為10倍、100倍和1 000倍的檢測液1 mL，分別將其注入到無菌培養皿中，每個稀釋度檢測液各放入兩個培養皿中。選擇沙堡羅瓊脂放入水浴鍋內融化，在溫度冷卻到45 ℃時，將瓊脂倒入培養皿當中，并立即進行搖動混勻，采用倒置方法在恒溫培養箱內進行培養。培養箱內溫度設定為28 ℃，培養時間為72 h，在培養結束后詳細記錄培養皿上霉菌和酵母菌的數量。另外需要選擇一個未添加檢測液的無菌培養皿，將沙堡羅瓊脂倒入培養皿內，并在瓊脂凝固后放入恒溫培養箱當中，溫度和培養時間也檢測液相同，作為對照組。
（2）實驗報告：先對每一個培養皿上生長的菌落數量進行統計，并計算每個稀釋濃度菌落數量的平均值，選擇菌落生長數量在5～50的培養皿，將菌落數與稀釋倍數相乘，所得結果即為每毫升消毒劑當中所含有的霉菌和酵母菌的總數。
1.2.3 致病菌的檢測 （1）金黃色葡萄球菌的檢測：①病菌培養方法： 選擇稀釋10倍的檢測液，將其加入兩倍濃縮的氯化鈉肉湯當中，該肉湯的濃度為7.5%，其中檢測液共10 mL、肉湯10 mL。將該培養皿放入恒溫培養箱中進行培養，溫度設定為36 ℃，培養時間為24 h。②病菌分離培養：利用接種環將培養皿當中的病菌取出，采用劃線法進行接種，培養基為血瓊脂培養基。將該培養基同樣放置在溫度為36 ℃的恒溫培養箱內培養，培養時間為48 h。金黃色葡萄球菌通過血瓊脂培養后整體呈金黃色，菌落大而突出，外形為光滑圓形，并且在菌落周圍可見明顯的溶血圈。利用接種環挑取單個菌落進行分離提純，采用同樣的溫度培養24 h。③菌落染色和鏡檢：選擇分裂提純培養后的菌落進行涂片，利用革蘭氏染色法，金黃色葡萄球菌呈陽性，在電子顯微鏡下其菌株排列成葡萄狀，并無芽孢分布，具有致病性的葡萄球菌個體較小，一般直徑在1 μm以下。④甘露醇發酵試驗：選擇分離培養后的菌株，將其接種在含有甘露醇的瓊脂培養基上，在溫度為36 ℃的環境中培養24 h，能夠使甘露醇發酵并產生酸性物質者判斷為陽性。⑤血漿凝固試驗：選擇稀釋4倍的人新鮮血液0.5 mL，將其加入到無菌試管當中，并加入通過肉湯培養的檢測菌落0.5 mL，充分混勻后放入恒溫培養箱內，溫度設定為36 ℃，每隔0.5 h觀察1次試管，如果試管內血液在6 h內出現凝塊情況，則判斷其為陽性。⑥實驗報告：該次實驗當中所生長的菌落，通過染色和鏡檢之后，如為金黃色則判定為革蘭氏陽性葡萄球菌，其能夠對甘露醇產生發酵反應，并且凝血實驗也呈陽性，說明檢出菌落為金黃色葡萄球菌。
（2）銅綠假單胞菌的檢測：①病菌培養：選擇稀釋度為10倍的檢測液10 mL，將其接種在普通肉湯當中，該肉湯共濃縮2倍，劑量為10 mL，將檢測液放置在36 ℃環境中進行培養，培養時間為24 h。如肉湯上方生成一層菌膜，并成黃綠或藍綠色，則說明有銅綠假單胞菌生成。②病菌分離培養：利用接種環挑取菌落，采用劃線法接種在培養皿上，該培養基的昂中含有十六烷三甲基溴化銨，將培養皿放置在36 ℃環境下培養24 h。該菌落生長無明顯形狀，以向四周隨機蔓延為主，菌落表面濕潤，顏色為灰白色，菌落周圍還可見明顯的水溶性色素，顏色為綠色。③染色鏡檢：在培養皿當中挑取菌落，革蘭氏染色后呈陰性的，可以開展氧化酶實驗。④氧化酶實驗：選擇無菌白色濾紙放置在平皿底部，利用接種環將菌落涂抹在濾紙上，然后加入1%的二甲基對苯二胺試劑，如果在30 min內菌落顏色變為粉色，則說明氧化酶反應陽性，反之則為陰性。⑤綠膿菌素試驗：選擇菌落2～3個，將其接種在綠膿菌素鑒定培養基上，放置在恒溫培養箱內培養，溫度設定為36 ℃，時間為24 h。培養結束后選擇氯仿約5 mL加入培養皿，充分震蕩混合，使綠膿菌素能夠溶解在氯仿當中，此時如果試劑變為藍色，則將試劑轉移到空試管內，并加入1 mL鹽酸，震蕩后如果溶液上層為粉紅色，則判斷為陽性。⑥硝酸鹽還原產氣試驗：接種環挑取菌落，將其接種在含有硝酸鹽蛋白胨的水培養基當中，同樣放置在溫度為36 ℃的恒溫培養箱內，培養時間為24 h。培養后如果小試管有氣體產生，則判斷為陽性。因為銅綠假單胞菌能夠將亞硝酸鹽還原，并生成氮氣。⑦明膠液化試驗：對菌落進行提純培養，并采用穿刺接種的方式，將其接種在明膠培養基內部，放置在培養箱內24 h，培養完畢后直接放入冰箱保鮮層，大約0.5 h，如果取出后明膠呈液化溶解狀態，則說明呈陽性，反之呈陰性。⑧實驗報告：經過分離提純染色檢查后，證明檢測液中含有革蘭氏陰性菌，氧化酶和綠膿菌素的實驗結果均呈陽性，說明其中含有銅綠假單胞菌。而如果綠膿菌素實驗呈陰性，而液化明膠、硝酸鹽還原實驗均呈陽性，則仍可說明其中含有銅綠假單胞菌。
（3）乙型溶血性鏈球菌的檢測：①病菌培養：選擇稀釋度為10倍的檢測液10 mL，將其接種在含有濃度2倍的肉湯當中，該肉湯中含有葡萄糖，放置在36 ℃的恒溫培養箱內，共培養24 h。②病菌分離培養：用接種環挑取培養后的菌落，采用劃線接種方式，將其接種在血培養基中，同樣放置在36 ℃環境下，共培養24 h。該菌種在血培養基上生長的菌落顏色為灰白色，通常稱不透明狀態，菌落頂端具有針狀突起，并且邊緣光滑整齊，在菌落周圍還存在明顯的溶血圈。③染色鏡檢：接種環挑取菌落，革蘭氏染色后呈陽性，在鏡檢下菌落排列呈鏈狀。
④觸酶試驗：利用接種環挑取菌落中心的菌體，將其接種在空載玻片上，選擇膠頭滴管在病菌上滴入濃度為30%的雙氧水，放置順序不可互換，否則會引發假陽性反應。觀察載玻片上是否有氣泡產生，如有氣泡則視為陽性，而乙型溶血性鏈球菌應呈陰性。⑤鏈激酶試驗：將0.02 g的草酸鉀與人體5 mL新鮮血液進行混合，經過充分離心后提取上清液備用。在草酸鉀血清中注入0.8 mL無菌生理鹽水，充分震蕩混合，然后將肉湯內培養的菌落加入試管中，并同時加入0.25 mL的氯化鈣試劑。將試管放入溫度為36 ℃的水浴鍋內進行孵化，每隔2 min對凝固程度進行觀察，在凝固后記錄血清的融化時間，如果凝固后2 min不出現融化情況，則將試管轉移到恒溫培養箱內培養24 h，培養后如血清融化，則說明為陽性。⑥桿菌肽敏感試驗：將菌落接種在血培養基上，利用消毒后的鑷子夾取含有0.04單位的桿菌肽試紙，并放入恒溫培養箱內，如果培養24 h后出現明顯抑菌帶，則判斷為陽性。⑦報告：被檢消毒劑經增菌培養后，經證實為革蘭氏陽性、呈鏈狀排列的球菌，觸酶陽性、鏈激酶試驗陽性、對桿菌肽敏感者，即可報告為檢出乙型溶血性鏈球菌。
2 結果
經檢測，21個被檢醫療機構的43個科室的使用中消毒劑合格率為82.6%，醇類消毒劑的合格率為92%，過氧化物類為79.3%，含氯消毒劑為97.6%，碘類消毒劑為98%，醛類消毒劑為76%，酚類消毒劑為99%；菌落總數超標率為5.5%，霉菌和酵母菌檢出率為1.3%，金黃色葡萄球菌檢出率為2%，銅綠假單胞菌檢出率為0.8%，乙型溶血性鏈球菌檢出率為1%，有些重要科室如產房，口腔科等重要科室，使用中消毒劑微生物污染嚴重，合格率較低[1]。
3 討論
對使用中消毒劑的配制和使用要做到：盛裝消毒劑的器皿在消毒劑配制前應進行消毒滅菌（高壓蒸汽滅菌或高溫干燥滅菌），消毒劑配制過程中要無菌操作；使用前應認真閱讀產品包裝上的產品說明、使用范圍、使用方法和注意事項等，并嚴格遵照執行；消毒劑應放置于陰涼通風處，避光、防潮、密封保存；按產品說明，根據有效成分含量按稀釋定律配制所需濃度；多數消毒劑配置后穩定性下降，要現用現配、使用前監測濃度。連續使用的消毒劑要每日監測濃度，或每次使用前監測濃度；用過的醫療器械和物品，應先去除污染，徹底清洗干凈再消毒；用于浸泡消毒時容器應加蓋，并放于通風良好的環境中；消毒劑均有一定的腐蝕性，不宜長時間浸泡物品或殘留在物體表面，作用時間達到后要取出并采取有效措施去除殘留消毒劑；消毒人員要做好個人防護[2]。
對使用中的消毒劑要加強管理，對不合格的醫療機構監督整改，定期對使用中消毒劑進行抽樣檢測，對降低院內感染率，避免重大院內感染事故的發生，有著非常重要作用[3]。
[參考文獻]
[1] 劉彩霞，等. 醫院使用中消毒劑的監測結果分析與管理[J]. 中華醫院感染學雜志，2012，22（4）：64-65.
[2] 李曉娟，張以梅.消毒供應中心去污區個人防護依從性的調查與分析[J].中華醫院感染學雜志2015（20）：4790-4791.
[3] 蘇晶靜. 探討供應室護理質量控制對降低院內感染的可行性 [J].中國衛生標準管理，2015（11）：224-225.
（收稿日期：2015-08-15）
<ol id="ebnk9"></ol>