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材料和方法
1.1 實驗材料
實驗用魚為羅非魚，平均體重（17.03±5.21）g。實驗前在塑料桶中暫養24 h，選擇健康、體質量均勻的個體在塑料瓶（1 L、5 L）中進行實驗。實驗周期為360 min。
6種實驗藥品分別為：?；撬幔ˋ）、維生素C（B）、葡萄糖（C）、潑灑姜-芳草（D）、應激寶（E）、漁精元（F），主要成分及產地見表1。
1.2 實驗方法
1.2.1 缺氧應激實驗
向塑料瓶中注入1 L經曝氣處理的蒸餾水，再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設置3個平行，并設1個對照（CK），然后隨機放入5尾羅非魚并將瓶口擰緊隔絕外界空氣，實驗開始后連續360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應情況。
1.2.2 二氧化氯應激實驗
向5 L塑料瓶中注入濃度約為150 mg/L的二氧化氯溶液（用池塘水為基礎水體進行配制），再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設置3個平行，并設1個對照，然后隨機放入5尾羅非魚，試驗開始后連續360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應情況。
1.2.3 氨氮應激實驗
向5 L塑料瓶中注入濃度約為80 mg/L的NH4CL溶液（用池塘水為基礎水體進行配制），再加入20 mg/L的藥品，混合均勻。每種藥品設置3個平行，并設置1個對照，然后隨機放入5尾羅非魚，實驗開始后連續360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應情況。
三種應激實驗中，以觀察魚呼吸停止后，即腮蓋停止運動，并用玻璃棒敲擊魚體無任何反應作為死亡判斷標準。
1.3 數據分析
采用SPSS19.0軟件對所有數據進行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan檢驗法統計分析（P<0.05）。數據用平均值±標準差（Mean±SD）表示。
2 結果與分析
2.1 三種應激實驗中羅非魚的存活率變化
2.1.1 缺氧脅迫下羅非魚存活率
由表2可知，各組之間的差異不明顯，84 min后存活率最高組為F組（86.67%），最低組為D組（53.33%）;104 min后存活率最高組為B組（53.33%），D組全部死亡;124 min后存活率最高組為E組（33.33%），A、C、D、CK組均死亡;144 min后存活率最高組為E組（33.33%），其余各組均死亡;360 min后各組均全死亡。
2.1.2 二氧化氯脅迫下羅非魚存活率 在15 min時，B組與A組差異顯著，兩組均與其它組差異不顯著。在30 min時，B組與E組差異不顯著，與其它各組差異顯著，C組和D組均與A組、F組、CK組差異顯著，與E組差異不顯著，A組的存活率最低，B組存活率最高。在45 min時，B組與各組差異均顯著，B組存活率最高。60 min后B組與C組差異顯著。75 min時，各組無顯著差異，B組的存活率最高（100%），其余各組均死亡（表3）。
2.1.3 氨氮脅迫下羅非魚存活率 在30 min時，A組與E組差異不顯著
，A組和E組均與其它各組差異顯著;180 min后，B組與F組差異不顯著，B組和F組與其它各組差異顯著;300 min后F組與各組差異顯著
，存活率最高，E組存活率最低為0;360 min后，B組與各組差異顯著
，F組與各組差異顯著，F組的存活率（93.33%）在360 min內為最高（表4）。
2.2 三種脅迫下羅非魚的行為反應
2.2.1 缺氧脅迫下羅非魚的行為反應
實驗開始時羅非魚游動正常，隨后逐漸游動緩慢，魚體失去平衡，部分羅非魚集中于瓶口快速呼吸，個別上下急速竄動，接著出現游動無力的現象，僅有口鰓不斷閉合，最終上浮后，墜入水底，反復幾次，直到死亡。死亡魚口張開，魚體僵硬，鰓蓋軟化受損，鰭條伸直展開。D組反應最劇烈，E組反應較其余各組弱。
2.2.2 二氧化氯脅迫下羅非魚的行為反應
實驗進行15 min后開始出現應激反應，表現為失去平衡，浮頭、沉入水底、上下激烈竄動，反應遲鈍，側躺水底不動，伴有側游、轉圈游動等現象，直接垂直緩落到瓶底，反復幾次后死亡。A組反應最劇烈，B組無明顯反應。
2.2.3 氨氮脅迫下羅非魚的行為反應
實驗進行30 min后開始出現應激現象，表現為上下竄游、水中急速跳躍、轉圈，直接游出水面急促呼吸，接著腹部上翻，腹面朝上斜游，活力減弱，反復數次后腹面朝上死亡。E組反應最劇烈，F組反應較其余各組弱。
3 結論與討論
3.1 缺氧脅迫下對羅非魚行為反應及存活率的影響
生產中造成魚類缺氧浮頭的主要原因有養殖過程中放養密度過大、池水過肥、施肥不當、水質污染、投飼過量、天氣突變等[8]，以及在魚類的運輸中，密閉的箱體和高密度的群體也極易造成魚類缺氧，使魚類出現浮頭，長時間的缺氧會使魚類出現死亡。當魚類在受到外界環境因素的不良刺激后會引發體內的保護屏障，而使魚體內產生一系列生理變化，即應激反應[9]。本研究發現，羅非魚在缺氧脅迫下各組中的存活率無顯著差異，在同一缺氧環境下，E組較其它各組的存活時間長，抗應激的能力較強。60 min后羅非魚表現出應激反應，即游動緩慢、無力，反應遲鈍，失去平衡，最后靜臥水底死亡。在同一缺氧環境脅迫下，D組的反應最為強烈，存活率最低，A、B、C、F組次之，E組的反應最不強烈。
應激寶中的主要成分是免疫多糖，免疫多糖中富含具有免疫功能的β-葡聚糖和功能性的寡糖，β-葡聚糖作為免疫增強劑廣泛應用于畜禽與水產養殖業[10]。有研究表明，β-葡聚糖能夠提高齊口裂腹魚腸道分泌性抗體的產生，增強腸道免疫功能，進而提高魚體的抗病、抗應激功能[11]。本研究中，應激寶的使用增加了羅非魚的非特異性免疫功能，提高了羅非魚的抗缺氧能力，推測藥品應激寶對羅非魚在缺氧脅迫下有較好的緩解應激作用。
3.2 二氧化氯脅迫下對羅非魚行為反應及存活率的影響
二氧化氯是水產養殖中的常用消毒劑，對細菌、芽孢和真菌等微生物具有很好的殺滅作用，且在低濃度下對水產動物無不良反應，同時二氧化氯作為強氧化劑，幾乎可以分解水中所有還原性污染物質，如殘剩餌料、排泄物等，極大程度地改善養殖水體[12];但高濃度下會對魚類造成嚴重的傷害，產生應激反應，并致死。本研究發現，羅非魚在同一質量濃度的二氧化氯脅迫下各組之間差異顯著，B組的存活率最高（100%），有較好的抗二氧化氯脅迫能力。當水體中二氧化氯濃度為150 mg/L時，羅非魚15 min后即表現出焦躁不安、上下竄動、浮頭、反應遲鈍等癥狀，最后呆滯于水底，失去平衡后死亡，這與唐洪玉等[13]研究的二氧化氯對湘云鯽的急性毒性試驗中的中毒癥狀相似。在同一質量濃度的二氧化氯溶液中，A組的反應最為強烈，死亡率最高，C、D、E、F組的反應次之，B組的反應最不強烈。
VC，又稱L-抗壞血酸，在動物生長發育、抗應激、免疫等方面均具有促進作用[14];宋學宏等[15]研究表明，在飼料中添加適量的VC可顯著提高異育銀鯽的免疫力，進而提高魚體的抗病力;李志輝等[16]認為在飼料中添加VC可促進錦鯉的生長發育和增強其機體非特異性免疫能力。本研究中，在360 min后，B組的存活率最高（100%），其它各組均死亡，VC顯著提高了魚體的免疫力，增強了魚體的抗病力和抗應激能力，有研究表明，VC還可通過神經調節因子，調節腦部的多巴胺和去甲腎上腺素的水平，從而控制魚類的行為，增強其抗應激能力[17]。本研究證明，VC在羅非魚抗二氧化氯脅迫中有較好的緩解應激作用。
3.3 氨氮脅迫下對羅非魚行為表現及存活率的影響
本研究結果表明，羅非魚在同一質量濃度的氨氮脅迫下，F組的抗應激能力較強，存活率最高。氨氮是養殖和運輸水體中一種常見的毒性物質[18]，主要是由餌料的殘留，動物的排泄物等產生的。氨氮對魚類的毒害作用主要歸因于其所包含的非離子氨的毒性[19]，當水體中離子氨的濃度較高時，會使魚類發生氨中毒，出現應激反應。本研究中，羅非魚剛開始表現出上下急速竄游、轉圈，后表現為失去平衡，腹部朝上游動，最后側臥瓶底，腹部朝上死亡，癥狀與樊海平等[20]研究的大刺鰍幼魚在氨氮脅迫下的中毒癥狀相似。在同一質量濃度的氨氮溶液中，E組的應激反應比其它幾組的要強烈，F組的反應最不強烈。
漁精元的主要成分是N-氨甲酰谷氨酸（NCG），有研究表明，大菱鲆幼魚中添加適量NCG有助于促進機體內源精氨酸合成，提高肌肉中精氨酸的含量，進而促進蛋白質合成及提高機體免疫功能[21];NCG還具有修復腸道，提高魚蝦的抗應激能力和免疫力，從而抵抗外界的各種刺激。本研究中，360 min后存活率最高組為F組，漁精元與同濃度的另外5種藥品相比顯著提高了羅非魚的免疫力和抗病能力，對氨氮脅迫有較好的緩解應激作用。
參 考 文 獻：
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