精氨酸對螞蟥誘食效應的初步研究

材料

螞蟥由南京農業大學中藥材研究所提供， 經郭巧生教授鑒定為螞蟥Wh. pigra；精氨酸、黃原膠、螺螄。

勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司），756CRT 紫外分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），FA1104分析天平（上海天平儀廠），835-50型氨基酸分析儀（日立835-50型）。

2 方法

2.1 試驗設計

以培養皿底部正中心為原點裁剪出直徑5 cm的空白區域，用1層醫用消毒紗布包裹培養皿底部覆蓋住底部的空白區域，并用橡皮筋固定。誘食試驗時，先將試驗材料放入培養皿，再將培養皿放入裝有10 cm高充分曝氣24 h水的玻璃缸中，規定底部空白區域即為誘食有效區，每組取10 條健康螞蟥放入玻璃缸中，共6個重復，試驗為60 min，每5 min統計進入誘食有效區螞蟥的條數（圖1）。對照組（CK）培養皿中不放東西^[13]。

2.2 誘食效應

2.2.1 排除活體螺螄振動刺激對試驗產生的影響 取3 只鮮活螺螄和3 只鮮殺的螺螄（將鮮活螺螄放入-20 ℃冰箱中冷凍3 h）分別放入2 個培養皿中，進行試驗。

2.2.2 底物（黃原膠）濃度的選擇及其對試驗產生的影響 精確稱取黃原膠，配成0.5%，1.0%，1.5%，2.0%的溶液，加熱使其全部溶解，自然冷卻（發現0.5%的溶液太稀不凝固，2.0%的則凝固硬度太大，故舍去0.5%，2.0%組）。分別將10 mL 1.0%，1.5%的黃原膠放入培養皿中，同時設置一個空白培養皿作為對照組，觀察對螞蟥誘食效果。

按上法配制1.0%，1.5%黃原膠溶液，冷卻后加入相同量螺螄提取液，分別取加了螺螄提取液的黃原膠10 mL放入2 個培養皿中，同時設置一個空白培養皿作為對照組，觀察對螞蟥誘食效果，篩選最適合的黃原膠濃度。

2.2.3 精氨酸濃度的選擇 根據以往實驗結果，精氨酸在螺螄體液質量分數為2.97 mg·g^-1，全肉則為7.09 mg·g^-1[11]，結合2.2.2試驗結果，篩選并配制適宜濃度的黃原膠，分成6組，每組加入不同濃度（0.0%，0.1%，0.3%，0.5%，0.7%，0.9%）精氨酸，每組取10 mL分別放入6 個培養皿中，同時設置一個空白培養皿作為對照組，觀察對螞蟥的誘食作用。

2.3 數據分析

統計60 min內螞蟥進入有效區的總條數，每組重復6 次，實驗數據以±s表示。試驗數據先用 Microsoft Excel 作初步處理， 然后采用 SPSS 18.0 軟件包（ One-Way ANOVA，LSD） 進行分析。

3 結果與分析

3.1 活體螺螄振動刺激對螞蟥攝食的影響

活體螺螄和死螺螄對螞蟥攝食的影響無顯著差異，可以排除活體螺螄振動因素對螞蟥攝食產生的影響（圖2）。

3.2 不同濃度黃原膠對螞蟥誘食的影響

1.0%，1.5%黃原膠和空白對照組對螞蟥攝食均無顯著性差異，說明1.0%，1.5%的黃原膠不吸引螞蟥，可以排除底物黃原膠對螞蟥攝食的影響（圖3）。

與空白組相比，含螺螄體液的組別對螞蟥有顯著誘食作用（P<005），其中底物黃原膠10%組別誘食效果優于15%組，且具有顯著性差異（P<005），可以篩選10%黃原膠做飼料的底物（圖4）。

3.3 不同濃度精氨酸對螞蟥誘食的影響

0.3%精氨酸對螞蟥的誘食效果最好，與其他組別相比具有顯著性差異，不含精氨酸的黃原膠組、空白組效果最差，不具備誘食作用，0.1%，0.7%對螞蟥有輕微誘食效果，與對照組有顯著性差異；0.9%，0.5%幾乎不具備誘食效果，與對照組差異不明顯（圖5）。

4 討論

4.1 螺螄體液對螞蟥有一定的誘食作用

在水生生物攝食機制的研究上，已有的研究表明光照、水溫、顏色、振動幅度、形態規格、氣味、外源物質等會影響水生動物物理感受器和化學感受器，從而影響其攝食行為。

本實驗結果表明，活體螺螄和鮮殺螺螄對螞蟥的誘食作用差異不顯著，排除了活體螺螄振動對螞蟥感受器刺激產生的攝食行為，同時也排除了底物黃原膠對螞蟥具有誘食作用。在光照、水溫等條件相似的情況下，與對照組相比，添加螺螄體液對螞蟥具有一定的誘食作用，實驗結果符合螞蟥喜食螺螄的天然習性，同時也說明螺螄體液中存在某種對螞蟥具有誘食作用的物質。

4.2 精氨酸對螞蟥有一定的誘食作用

許多研究表明，不同濃度的精氨酸對水生動物攝食的影響不一樣，隨著濃度的變化有表現抑制攝食的，也有表現出促進攝食和誘食作用的。

梁萌青等對3種魚類誘食活性研究表明，0.5 mmol·L^-1精氨酸對真鯛有明顯誘食作用^[14]；Tolomei等發現，在鯉魚飼料中添加精氨酸誘食效果最好^[15]。本試驗結果表明，不同濃度精氨酸對螞蟥均有一定誘食作用，0.3%時誘食作用最明顯，之后呈下降趨勢，這結果與宋天復等對金魚的誘食研究結果相一致^[16]。而伍一軍等卻發現低濃度精氨酸（0.01 mol·L^-1）對泥鰍有極其顯著的抑制反應，但較高濃度（0.015 mol·L^-1）卻呈現出誘食趨勢^[17]；楊代勤等也發現，隨著精氨酸濃度從0.5%增加到10.0%，對黃鱔攝食的影響從微弱抑制轉為促進攝食，且促進攝食的強度與濃度成正比^[18]。這可能與不同動物的味、嗅覺感受器對氨基酸的識別和敏感性不一樣有關。

4.3 小結

本實驗結果顯示0.3%精氨酸對螞蟥有顯著誘食作用，這一濃度與螺螄體液中精氨酸含量非常接近，因此今后可在此實驗模型基礎上繼續研究螺螄中其他氨基酸是否對螞蟥有誘食和促生長作用，為螞蟥配合飼料的研究和生產提供依據和指導。

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Primary study of arginine as feed attractants on Whitmania pigra

WANG Jia， GUO Qiao-sheng， SHI Hong-zhuan*， LIU Hong， QIAN Wei-lun， DUAN Shu-yu， GENG Tian-hua

（Institute of Chinese Medicinal Materials， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China）

[Abstract] The effects of the feed attractants on Whitmania pigra were studied. The average weight of Wh. pigra were 5.0 g. Arginine was selected as feed attractants， xanthan gum was selected as feed substrate. The times of Wh. pigra going into the inducing room were recorded. The water temperature was 22-25 ℃ during the whole experiment. Arginine that had better inducing effect was chosen to carry on in the gradient experiment. The results showed that the best inducing effect was found when the added amount of arginine was 0.3%， which was close to the arginine content of the natural body fluid of Wh. Pigra and Bellamya purificata， 2.97 mg·g^-1.

[Key words] Whitmania pigra；arginine；attractants

doi：10.4268/cjcmm20141913

[責任編輯 呂冬梅]