主要水環境因子對懷頭鯰爛鰓病的影響

材料和方法

1.1 材料來源

2016年7月至2016年8月期間，分別對遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村懷頭鯰養殖戶的5個患有爛鰓病的池塘和3個未發病的池塘進行了魚體采樣與水質監測。魚體經過鏡檢，未發現寄生蟲。

1.2 水質分析

氨態氮采用實驗室Nessler法測定，亞硝酸態氮采用對氨基苯磺酸固體試劑分光光度計法測定，溶解氧采用碘量法測定[1]，pH值采用型號為梅特勒-托利多的FE20筆形pH計測定。

1.3 組織切片與觀察

取發病池塘中患有爛鰓癥狀的懷頭鯰以及未發病池塘中養殖健康的懷頭鯰；經震蕩其頭部，使魚體處于昏厥狀態；再用清水沖洗，擦拭干凈后取魚體的鰓部組織塊（1 cm×1 cm×1 cm），用新鮮配制的波恩氏液[2]固定48 h后，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟（55～60 ℃）包埋。

切片厚度6 μm，再進行蘇木精-曙紅（H.E）染色、中性樹膠封片，最后用E-CLIPSE E600顯微鏡觀察、拍照[3]。

1.4 數據分析與處理

實驗描述結果均值用“平均值±標準差”表示，采用SPSS17.0在a=0.05水平下進行統計分析，數據經SPSS17.0的一維方差分析中List比較和單一樣本t檢驗，進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀

從2016年7月起，遼寧省燈塔市柳條寨李大仁村養殖戶的懷頭鯰相繼患有爛鰓病。發病池塘邊可見部分浮于水面的懷頭鯰，病魚具有溜邊、側翻現象，并且游動緩慢。8月份起，發病池塘邊可見大量浮于水面的懷頭鯰，并見大量死魚。懷頭鯰患病率達70%以上，死亡率達20%以上。病魚的最顯著特征表現為鰓組織紅腫、充血，黏液分泌增多，同時上邊掛滿泥土；活體解剖后發現腸內壁掛有淡黃色積液；病魚體表發紅，充血；肝臟腫大。

2.2 患病池塘與未患病池塘主要水環境因子結果分析

從表1可見7月份未患病池塘養殖水溫26.0 ℃左右，溶解氧均值在8 mg/L左右，pH均值為8.0上下，偏弱堿性，氨氮值小于0.5，亞硝酸鹽值小于0.02，這與淡水養殖水體的水化的指標相符。7月份患病池塘溶解氧均值在5 mg/L左右，氨氮經SPSS17.0的單一樣本t檢驗，以淡水養殖水體正常值0.5為參考值，檢驗（P>0.05）呈不顯著性差異。但均值大于正常淡水養殖水體值0.5，超出了正常養殖水體指標；患病池塘亞硝酸鹽經SPSS17.0的單一樣本t檢驗，以淡水養殖水體正常值0.02為參考值，檢驗（P>0.05）呈不顯著性差異。但均值大于正常養殖水體值0.02，超出了正常養殖水體指標。

8月份未患病池塘養殖水溫30.0℃左右，溶解氧均值在9 mg/L左右，pH均值變化不大，偏弱堿性，氨氮值小于0.5，亞硝酸鹽值小于0.02，這符合淡水養殖水體的水化指標。8月份患病池塘溶解氧均值4 mg/L左右，pH值變化不大，患病池塘氨氮、亞硝酸鹽經SPSS17.0的單一樣本t檢驗，以淡水養殖水體正常值0.5和0.02為參考值，檢驗（P<0.05）均呈顯著性差異。其均值分別大于淡水養殖水體正常值0.5和0.02，超出了正常養殖水體指標。

7、8月份同一患病池塘的氨氮、亞硝酸鹽分別經過SPSS17.0一維方差分析中List比較，檢驗（P<0.05）均呈顯著性差異；溶解氧經過SPSS17.0一維方差分析中List比較，檢驗（P>0.05）呈不顯著性差異。未患病池塘測定的主要水環境指標值符合淡水養殖水體指標要求。

2.3 鰓組織顯微病理變化

鰓與對照組比較（圖1-1），病魚鰓組織呼吸上皮細胞與相鄰的鰓小片呼吸上皮細胞形成增生性融合，呈板狀；并有許多炎性細胞浸潤其中（圖1-2）。部分鰓小片呼吸上皮細胞腫脹后，與毛細血管分離形成腔隙（圖1-3）。局部鰓小片末端膨脹成棒球狀，其間毛細血管擴張，充血（圖1-4）。

3 討論

患有爛鰓癥狀的病魚，鰓組織紅腫，黏液增多；從圖Ⅰ-2、3、4觀察可知，病魚鰓小片上皮細胞腫脹、增生，其間毛細血管擴張，充血，并有炎性細胞浸潤；病魚8月份發病率和死亡率均高于7月份。從表1數據結果分析：7、8月份患病池塘中的氨氮、亞硝酸鹽指標測定值均大于淡水養殖水體指標的正常值，而7、8月份氨氮、亞硝酸鹽指標測定值顯著大于7月份（P<0.05）指標測定值；同時7月份患病池塘溶解氧的指標測定值在淡水養殖水體指標的正常值5 mg/L左右， 8月份患病池塘溶解氧的指標測定值小于淡水養殖水體指標的正常值5 mg/L，兩者均小于未患病池塘的溶解氧指標測定值。此外，通過表1數據可知，養殖水體pH值在8上下，呈弱堿性，這時水體中的氨氮主要以非離子態NH3-N的形式透過鰓組織的細胞膜；通過鰓細胞膜的NH3-N又以游離態NH4+-N進入魚體血液中，其血液中的氨氮濃度隨之升高，并在高氨濃度下，魚體的血液輸氧能力大幅下降，此時魚體內多種活性酶受到抑制，又因為多余的廢氮難以排除，最終導致氧氣和廢物交換不暢，從而破壞了魚類鰓組織。再者，當亞硝酸鹽濃度高于淡水養殖水體指標的正常值后，亞硝酸氮透過鰓組織細胞膜，并在血液中以游離態形式進入魚體各組織細胞的細胞質內，阻斷了其遺傳物質的正常合成，細胞外間質的遺傳物質遭到降解，最終導致細胞外間質消失[4]，進一步加劇了魚體的發病率和死亡率。

病魚腸內壁有淡黃色液體。由表1數據分析可知，7、8月份氨氮、亞硝酸鹽指標測定值均高于淡水養殖水體指標值，這將使魚體血液氨氮和亞硝酸鹽濃度增高，從而導致了腸組織細胞外間質的降解，造成了腸組織上皮細胞的損壞；受損的組織成為某些細菌或病毒的營養源，進一步導致腸組織炎性細胞分泌增多，腸內壁掛有積液，腸組織功能性失調。氨氮、亞硝酸對肝臟的影響與對腸組織作用機理類似，肝組織受損最終導致肝臟分泌與合成功能受到影響[5-9]。

病魚魚體發紅、充血。表1可知，患病池塘水溫在26～31 ℃之間，溶解氧均值長期在5 mg/L左右，致使氨轉化為硝酸鹽過程受阻，亞硝酸鹽在水中聚積；聚積的亞硝酸將血液中的血紅蛋白轉化為高鐵血紅蛋白，從而使血液失去了輸送氧氣的能力；進一步導致了魚體血紅細胞產生還原機制的障礙，進而發生細胞核破裂與細胞膜受損導致的溶血、魚體發紅癥狀。

4 小結

本文通過對患有懷頭鯰爛鰓病池塘中水質的監測，來探討主要水環境因子對懷頭鯰爛鰓病的影響，并為懷頭鯰在今后的生產實踐防病過程提供一定的理論基礎。

參考文獻：

[1] 淡水養殖水化學[M].廣西：廣西科學技術出版社，1990：180-199

[2] 曹焯，陳茂生.組織實驗指導[M].北京：北京大學出版社，1993：164

[3] 洪水根.動物顯微技術學[M].廈門：廈門大學出版社，1989：141-153

[4] 張潔明，郭峰，柳凌.環境因子對魚鰓細胞外間質的影響初探[J].淡水漁業，2004（5）：30-31

[5] Gaetke L M ，Chow C K.Copper toxicity，oxidative stress ，and an tioxidant nutrients[J].Toxicology，2003（189）：147-163

[6]Malatt J.Fish gill structural changes induced by toxicants and other irritants：A statistical review[J].Can J Fish Aquat Sci，1985（42）：630-648

[7] 宋振榮.水產動物病理學[M].廈門：集美大學出版社，2000（中冊）：39-42

[8] 趙典惠，劉麗波，孫際佳等.用美人魚弧菌與創傷弧菌人工感染卵形鯧鯵的組織病理學研究 [J].大連水產學院學報，2007，22（6）：455-459

[9] 劉振勇，謝友佺，林小金.大黃魚肝臟病變組織病理學觀察 [J].海洋水產研究，2007，28（5）：7-11